ClodronateLiposomes巨噬細胞清除套裝

產品簡介：

清除(chu)巨(ju)噬(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(depletion of macrophages)是研究巨(ju)噬(shi)細(xi)(xi)胞(bao)功能的(de)重要方法(fa)。荷蘭(lan)阿姆斯特丹Vrije University 的(de)Nico van Rooijen教授開發(fa)的(de)一款Clodronate Liposomes，可以(yi)利用巨(ju)噬(shi)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)內吞機(ji)制(zhi)，將脂質體(ti)包裹的(de)膜(mo)不(bu)通透(tou)性的(de)氯(lv)磷(lin)酸(clodronate)帶入細(xi)(xi)胞(bao)內，利用“特洛伊木(mu)馬機(ji)制(zhi)”從而(er)達到去除(chu)巨(ju)噬(shi)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)目的(de)。

作用原理:

兩親性磷脂分(fen)子在(zai)水(shui)(shui)中(zhong)(zhong)(zhong)可以(yi)形成同心圓形式的(de)磷脂雙分(fen)子層球體(ti)(ti)，磷脂雙分(fen)子層中(zhong)(zhong)(zhong)間(jian)(jian)通(tong)(tong)過水(shui)(shui)相分(fen)隔。溶(rong)(rong)解(jie)在(zai)水(shui)(shui)溶(rong)(rong)液中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)氯(lv)(lv)磷酸(suan)鹽在(zai)形成脂質(zhi)體(ti)(ti)的(de)過程(cheng)中(zhong)(zhong)(zhong)被包裹(guo)進(jin)磷脂雙分(fen)子層之間(jian)(jian)的(de)水(shui)(shui)相中(zhong)(zhong)(zhong)(如圖1)。游離的(de)氯(lv)(lv)磷酸(suan)鹽不能(neng)自(zi)由的(de)通(tong)(tong)過脂質(zhi)體(ti)(ti)的(de)磷脂雙分(fen)子層。隨(sui)著(zhu)脂質(zhi)體(ti)(ti)被巨噬(shi)細胞(bao)(bao)吞(tun)噬(shi)，在(zai)巨噬(shi)細胞(bao)(bao)溶(rong)(rong)酶體(ti)(ti)磷酸(suan)酶的(de)作用下(xia)，溶(rong)(rong)解(jie)在(zai)脂質(zhi)體(ti)(ti)水(shui)(shui)相中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)氯(lv)(lv)磷酸(suan)鹽就可以(yi)被逐步釋放出(chu)(chu)來，并累積在(zai)細胞(bao)(bao)內(nei)，當其達到一(yi)定(ding)濃度時(shi)，巨噬(shi)細胞(bao)(bao)將會受到不可逆(ni)轉(zhuan)的(de)損傷(shang)，從(cong)而進(jin)入(ru)凋(diao)亡(wang)過程(cheng)。從(cong)死亡(wang)的(de)巨噬(shi)細胞(bao)(bao)中(zhong)(zhong)(zhong)釋放出(chu)(chu)來的(de)氯(lv)(lv)磷酸(suan)鹽在(zai)細胞(bao)(bao)外的(de)半衰期極短(duan)(大約15min)，可以(yi)通(tong)(tong)過泌尿系統排除體(ti)(ti)外。

CLODRONATE LIPOSOMES & CONTROL LIPOSOMES (PBS)

氯膦酸鹽脂(zhi)質體(ti)和對照脂(zhi)質體(ti)（PBS）

SKU: CP-005-005

Category: Liposomal formulations

clodronateliposomes脂質體CP-005-005構成：

氯膦酸鹽脂質體：

由(you)同心磷脂雙(shuang)(shuang)層(ceng)構(gou)成的(de)人造球，該雙(shuang)(shuang)層(ceng)包裹著含有氯(lv)膦酸(suan)鹽的(de)PBS（磷酸(suan)鹽緩沖液(ye)）水(shui)溶液(ye)。脂質體是顆粒，大(da)小大(da)。3微米。它(ta)們在(zai)PBS中形(xing)成懸(xuan)浮(fu)液(ye)，在(zai)儲存(cun)時會沉(chen)淀，在(zai)試管或燒瓶的(de)底部形(xing)成沉(chen)淀。在(zai)對實驗動物給藥(yao)之前，應先搖晃(huang)懸(xuan)浮(fu)液(ye)，以回收均勻(yun)的(de)懸(xuan)浮(fu)液(ye)。

對照脂質體（PBS）：

對照(zhao)脂質(zhi)體不含氯膦(lin)酸鹽。它們(men)僅(jin)含有(you)PBS，可用于對照(zhao)實驗，以查明注射(she)氯膦(lin)酸鹽脂質(zhi)體后(hou)觀察到的效果是否僅(jin)是由于巨噬(shi)細胞耗竭所致。

clodronateliposomes脂質體CP-005-005產品描述

磷脂(zhi)(zhi)雙層(ceng)由(you)磷脂(zhi)(zhi)酰膽堿和膽固(gu)醇組(zu)成。將所有脂(zhi)(zhi)質體制劑懸浮在無菌磷酸鹽緩(huan)沖(chong)鹽水(shui)（PBS）中：

– 10 mM的Na2HPO4；

– 10毫(hao)米NaH2PO4；

– 140毫米(mi)氯化鈉(na)。

我們所有的脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)均帶負電荷(he)，因此不會(hui)一起(qi)阻塞。懸浮(fu)液中的脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)沒(mei)有大(da)小，這意味著它也包含(han)越(yue)(yue)來(lai)越(yue)(yue)大(da)的脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)（大(da)3微米(mi)）。平(ping)均而言，脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)的大(da)小為1.7微米(mi)。

氯膦酸鹽(yan)脂質體(ti)：人工(gong)制(zhi)備的(de)脂質囊(nang)泡(pao)的(de)懸浮液，包裹了氯膦酸鹽(yan)。懸浮液中氯膦酸鹽(yan)的(de)濃度約(yue)為。5毫克(ke)/毫升(sheng) 氯膦酸鹽(yan)以CH2Na2Cl2O6P2·5 H2O的(de)形式封裝在(zai)脂質體(ti)囊(nang)泡(pao)中。

PBS脂質體：人工制備(bei)的脂質囊(nang)泡的懸浮液，其中包裹了PBS水溶液。這些不含氯膦酸鹽(yan)，可用于對照實驗(yan)。

熒(ying)光DiI脂(zhi)質體：人(ren)工制備的脂(zhi)質囊泡的懸浮液，其中(zhong)包封(feng)了PBS水(shui)溶液，并用(yong)熒(ying)光染料(liao)DiI標(biao)記。它們不(bu)含氯膦酸(suan)鹽(yan)，可用(yong)于研(yan)究通(tong)過(guo)特定給(gei)藥途徑注射的脂(zhi)質體是否能(neng)夠到達要(yao)研(yan)究的巨噬細胞。

儲(chu)存和使用說明

到(dao)達脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)后(hou)，應將其(qi)儲存在(zai)4 – 8ºC（或39 – 47ºF）之間。脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)懸浮液不得冷凍，也不要暴露于高溫(wen)下。這可(ke)能(neng)會(hui)對磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)雙層(ceng)造成干擾，可(ke)能(neng)導致氯膦酸鹽從脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)中泄漏(lou)出來。

給藥前，首先(xian)使脂質(zhi)體(ti)達(da)到(dao)室(shi)溫，然(ran)后(hou)輕(qing)輕(qing)搖動或攪拌懸浮液。一(yi)段(duan)時(shi)(shi)間后(hou)，脂質(zhi)體(ti)易于沉淀，導致小瓶中(zhong)(zhong)的分布不均(jun)勻。當注(zhu)射(she)花費(fei)太(tai)多時(shi)(shi)間時(shi)(shi)，脂質(zhi)體(ti)甚至可(ke)能(neng)在注(zhu)射(she)器(qi)中(zhong)(zhong)沉淀。如果使用同(tong)一(yi)注(zhu)射(she)器(qi)注(zhu)射(she)多只動物，可(ke)能(neng)會導致劑量不同(tong)。

不建議稀(xi)釋懸浮液，但如有必要，請使用(yong)PBS或鹽(yan)水。

我們(men)建議客戶在發貨(huo)后(hou)(hou)16周內使用脂質體制劑。強烈建議不要在到期日(ri)期之后(hou)(hou)使用。在此期間之后(hou)(hou)，污染(ran)的(de)風險(xian)會(hui)增加，并且可能會(hui)發生輕微的(de)功能喪(sang)失(shi)。

作(zuo)用機(ji)理(li)

巨(ju)噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)在(zai)免疫和(he)(he)非免疫防御(yu)機(ji)制中起重要作(zuo)用。它(ta)們(men)(men)(men)是(shi)抵御(yu)滲透到脊(ji)椎動(dong)物(wu)體內(nei)的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌，病(bing)毒(du)和(he)(he)其他形式的(de)(de)微生物(wu)污染的(de)(de)首道防線。巨(ju)噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)是(shi)大型細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，幾乎存在(zai)于所(suo)有(you)身(shen)體組織中，它(ta)們(men)(men)(men)可以具有(you)不同的(de)(de)形式和(he)(he)名稱(cheng)（例如(ru)庫普弗細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，肺泡巨(ju)噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，小(xiao)膠質(zhi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，破骨細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，紅髓巨(ju)噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)）。巨(ju)噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)“清除”，它(ta)們(men)(men)(men)攝入并消化可能(neng)是(shi)潛在(zai)病(bing)原體的(de)(de)所(suo)有(you)異物(wu)，微生物(wu)，癌細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)碎片。該過(guo)程稱(cheng)為吞噬(shi)(shi)(shi)作(zuo)用。巨(ju)噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)主要通過(guo)可溶性分子(zi)如(ru)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)因子(zi)和(he)(he)趨(qu)化因子(zi)的(de)(de)介導來進一(yi)步調節許多非吞噬(shi)(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)功能(neng)。他們(men)(men)(men)參與先天免疫，

脂質(zhi)體(ti)(ti)是(shi)人工制備的(de)(de)球體(ti)(ti)，由同(tong)心磷(lin)脂雙(shuang)(shuang)層(ceng)組成(cheng)。當(dang)磷(lin)脂分(fen)(fen)(fen)(fen)散在(zai)水(shui)中(zhong)(zhong)(zhong)時，親水(shui)性頭部(bu)將(jiang)(jiang)構(gou)成(cheng)脂質(zhi)體(ti)(ti)的(de)(de)兩(liang)個外(wai)部(bu)部(bu)分(fen)(fen)(fen)(fen)，而疏(shu)水(shui)性脂肪酸(suan)(suan)基團(tuan)將(jiang)(jiang)構(gou)成(cheng)內部(bu)部(bu)分(fen)(fen)(fen)(fen)（見(jian)圖1）。水(shui)室分(fen)(fen)(fen)(fen)隔雙(shuang)(shuang)層(ceng)，親水(shui)分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)可以(yi)溶(rong)(rong)解在(zai)其中(zhong)(zhong)(zhong)，形成(cheng)脂質(zhi)體(ti)(ti)包封(feng)的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)。氯(lv)膦酸(suan)(suan)鹽（二氯(lv)亞甲基雙(shuang)(shuang)膦酸(suan)(suan)酯(zhi)或Cl2MBP）是(shi)一(yi)種親水(shui)性分(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)，可以(yi)封(feng)裝在(zai)磷(lin)脂雙(shuang)(shuang)層(ceng)中(zhong)(zhong)(zhong)。游離氯(lv)膦酸(suan)(suan)鹽不易穿過細(xi)胞(bao)(bao)膜，并通(tong)(tong)過腎臟系統從循環中(zhong)(zhong)(zhong)迅速清除(chu)（即數(shu)分(fen)(fen)(fen)(fen)鐘內）。但是(shi)，氯(lv)膦酸(suan)(suan)鹽脂質(zhi)體(ti)(ti)包埋在(zai)脂質(zhi)體(ti)(ti)中(zhong)(zhong)(zhong)時，會被巨噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)吞噬(shi)，無(wu)法逃(tao)脫（見(jian)圖2）。磷(lin)脂雙(shuang)(shuang)層(ceng)被溶(rong)(rong)酶體(ti)(ti)磷(lin)脂酶消化，而氯(lv)膦酸(suan)(suan)鹽未被消化并且保留(liu)在(zai)巨噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)(zhong)(zhong)。巨噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)攝入的(de)(de)磷(lin)脂雙(shuang)(shuang)層(ceng)和(he)脂質(zhi)體(ti)(ti)越多(duo)，在(zai)巨噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)內積累(lei)的(de)(de)氯(lv)膦酸(suan)(suan)鹽越多(duo)。超過一(yi)定的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)內濃度(du)，氯(lv)膦酸(suan)(suan)鹽將(jiang)(jiang)通(tong)(tong)過啟動(dong)程序性細(xi)胞(bao)(bao)死亡（即凋亡）來消除(chu)巨噬(shi)細(xi)胞(bao)(bao)。

圖1.氯膦酸(suan)鹽脂(zhi)質(zhi)體(ti)的(de)示(shi)意(yi)圖。囊泡由同心的(de)磷脂(zhi)雙層構(gou)成(cheng)，被水(shui)(shui)性隔室(shi)隔開。雙層由親水(shui)(shui)和疏水(shui)(shui)基團組成(cheng)。將氯膦酸(suan)鹽（在此以黑色方塊表示(shi)）溶解在水(shui)(shui)溶液中并封(feng)裝在脂(zhi)質(zhi)體(ti)內。

圖2.巨(ju)(ju)噬細胞對氯膦(lin)(lin)酸鹽脂(zhi)(zhi)質體的(de)攝(she)取(qu)和消化示意(yi)圖。巨(ju)(ju)噬細胞通過(guo)胞吞(tun)作用攝(she)入(ru)氯膦(lin)(lin)酸鹽脂(zhi)(zhi)質體，然后與含有磷(lin)脂(zhi)(zhi)酶(mei)的(de)溶酶(mei)體（L）融合（箭(jian)頭）。磷(lin)脂(zhi)(zhi)酶(mei)破壞的(de)磷(lin)脂(zhi)(zhi)雙(shuang)層越多(duo)，在(zai)巨(ju)(ju)噬細胞內釋放的(de)氯膦(lin)(lin)酸鹽（黑色方塊）越多(duo)。巨(ju)(ju)噬細胞終(zhong)通過(guo)凋亡被殺死。（N =巨(ju)(ju)噬細胞核）。

因此(ci)(ci)，氯膦酸鹽脂(zhi)(zhi)質(zhi)體可(ke)(ke)用于通過(guo)消(xiao)耗巨(ju)(ju)噬細胞(bao)來研(yan)究巨(ju)(ju)噬細胞(bao)功能。例如，它們可(ke)(ke)以(yi)應用于各種(zhong)自(zi)身免疫性(xing)疾病，移植，神(shen)經系統疾病和基因治療(liao)的(de)(de)模型。氯膦酸鹽脂(zhi)(zhi)質(zhi)體只有(you)在可(ke)(ke)以(yi)達(da)到的(de)(de)情況下才(cai)能耗盡(jin)巨(ju)(ju)噬細胞(bao)。一些組織可(ke)(ke)以(yi)形(xing)成脂(zhi)(zhi)質(zhi)體的(de)(de)屏障。通過(guo)選(xuan)擇氯膦酸鹽脂(zhi)(zhi)質(zhi)體的(de)(de)正確給藥途徑(jing)，可(ke)(ke)以(yi)耗盡(jin)特定的(de)(de)器官或組織的(de)(de)巨(ju)(ju)噬細胞(bao)。有(you)關管理(li)協議的(de)(de)更多(duo)信(xin)息，請單擊此(ci)(ci)處。

PBS脂質(zhi)體(ti)主要(yao)用于對照實驗。但是(shi)，這些也(ye)可(ke)(ke)以在某些時間(jian)段內通過飽和(he)來阻(zu)止吞噬(shi)作(zuo)用。因此，PBS脂質(zhi)體(ti)不能代表(biao)正常健康的(de)(de)(de)，未阻(zu)斷的(de)(de)(de)，未抑制的(de)(de)(de)和(he)未活化的(de)(de)(de)巨噬(shi)細胞的(de)(de)(de)對照實驗。當(dang)比較(jiao)氯膦酸鹽脂質(zhi)體(ti)和(he)PBS脂質(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)作(zuo)用時，其作(zuo)用因此可(ke)(ke)能小于預期。

有關更多(duo)信息，請參見：

– Van Rooijen，N.和Sanders，A.（1994）。脂質(zhi)(zhi)體介導(dao)的巨噬細胞耗竭：作用機理，脂質(zhi)(zhi)體制(zhi)備和應(ying)用。免疫學雜志，174（1-2），83-93。

– Van Rooijen，N.，Sanders，A.和van den Berg，TK（1996）。脂質體介導(dao)的氯(lv)膦酸鹽和丙am的細(xi)胞(bao)內遞送誘(you)導(dao)的巨噬細(xi)胞(bao)凋亡。免疫(yi)學雜志(zhi)，193（1），93-99。

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